標(biāo)題名稱：MHCC-97L MHCC-97L細胞 細胞株培養(yǎng)

細胞名稱：MHCC-97L 人低轉(zhuǎn)移肝癌細胞

種屬：人

組織來源：肝

生長狀態(tài)：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮樣

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基類型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

德國SERANAS-FBS-SA-015: 10%

抗生素：雙抗

培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5%

傳代方法   收到細胞后，在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)：

如果沒長滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細胞已經(jīng)長滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時觀察細胞狀態(tài)變化，待細胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

 一般沒有特殊說明，細胞一般是一傳二。

凍存方法   70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲存：液氮中長期保存。

注  1 觀察細胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計細胞密度。

2 在運輸過程中可能會導(dǎo)致一些貼壁不牢的細胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細胞污染等，請拍照并在一周內(nèi)與我們。

我公司建議用我們實驗室所用血清品牌和貨號，細胞長勢好，貼壁度強，凡購買我公司MHCC-97L細胞，我們會贈送20-50ML試用裝一瓶。

MHCC-97L MHCC-97L細胞 細胞株培養(yǎng)-慧穎細胞庫培養(yǎng)經(jīng)驗：1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺得這樣可以避免污染。如遇到有培養(yǎng)基越來越呈現(xiàn)紫色現(xiàn)象，是因為燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。2. 不要頻繁看細胞。對于初學(xué)者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細胞，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學(xué)者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大。在做血管平滑肌原代的時候，37度消化隔夜，細胞也沒事。我們一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時的機械應(yīng)力相當(dāng)大，對細胞的傷害也是很大的。

KYSE30細胞*人食管鱗癌細胞

RKO細胞*人結(jié)腸腺癌細胞

HO-8910細胞*人卵巢癌細胞

HS-578T細胞*人乳腺癌細胞

BE(2)-M17細胞*人神經(jīng)母細胞瘤細胞

HT-22細胞*小鼠海馬神經(jīng)元細胞

MLE-12細胞*小鼠肺上皮細胞

HK-2細胞*人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

MRC-5細胞*人胚肺成纖維細胞