CCD-1095Sk細胞系

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常規(guī)細胞培養(yǎng)方法

初代培養(yǎng)

原理

將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。    

儀器、材料及試劑

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血球計數(shù)板、離心機、水浴箱（37℃）

材料：動物組織塊

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

初代消化培養(yǎng)法

1.準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

我們實驗室細胞傳代的一般方法

這一方法較簡單，不需要離心，而且消化后細胞很少聚集成團，具體步驟如下：

1、吸盡待傳代細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)液，按1：1 的比例加入適量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培養(yǎng)瓶各加2滴管消化（消化時不要晃動培養(yǎng)瓶，以免消化不*而導致細胞成片脫落，從而導致細胞成團，無法吹散）。

2、消化致細胞變圓，細胞相互脫離接觸但還未從瓶壁脫落時，吸盡胰酶和EDTA。

3、利用殘留的胰酶和EDTA繼續(xù)消化數(shù)分鐘。

4、加入適量培養(yǎng)液，反復吹打，然后分別接種致新的培養(yǎng)瓶。

注：消化的時間需根據(jù)不同細胞摸索確定。

ACC-2人涎腺腺樣囊性癌細胞

ACC-3人腺樣囊性癌

ACHN人腎透明細胞癌細胞

AE-1雜交瘤細胞抗AChE

AE-2雜交瘤細胞抗AChE

AGS人胃腺癌細胞

AN3CA人子宮內(nèi)膜腺癌細胞

ANA-1小鼠巨噬細胞

ARO甲狀腺癌細胞（未分化）

AsPC-1人轉移胰腺腺癌細胞

ATT-20小鼠垂體瘤

B16小鼠黑色素瘤細胞

B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細胞

B95-8絨猴EBV轉化的白細胞

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞

Bcap-37人乳腺癌

BEL-7402人肝癌

BEL-7404人肝癌

BEL-7405人肝癌

Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細胞

BGC-823低分化胃腺癌

BHK-21 [C-13]倉鼠腎成纖維細胞

BIU-87人膀胱癌細胞

BMSC人骨髓間充質干細胞

BNL CL.2小鼠胚胎肝細胞

BRL大鼠肝細胞

BRL 3A大鼠肝細胞

BT-20人乳癌

BT-325人腦多形性膠質瘤細胞

BT474人乳腺導管癌細胞

BT-549人乳腺管癌細胞

BxPC-3人原位胰腺腺癌細胞

C127小鼠乳腺腫瘤細胞

C200人卵巢癌

C26小鼠結腸癌

C2C12小鼠成肌細胞

C-33 A人子宮頸癌

C3H小鼠胚胎成纖維細胞

C6大鼠腦膠質瘤細胞

Ca Ski人宮頸癌腸轉移細胞

Caco-2人結直腸腺癌細胞

CaKi-1人腎透明細胞癌細胞

CaKi-2人腎透明細胞癌細胞

CAL-27人舌鱗癌細胞

Calu-1人肺癌細胞

Calu-3人肺腺癌 (胸水)

Calu-6人退行性癌細胞

CaOV3人卵巢癌細胞

Capan1人胰腺癌細胞

Capan2人胰腺癌細胞

CaSki人宮頸腸轉移癌細胞

CBRH-7919大鼠肝癌細胞

CCD-1095Sk人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞

CCRF-CEM人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞

CEM/C1人急性淋巴細胞白血病細胞

CFPAC-1人胰腺癌細胞

Chang liver人張氏肝細胞

CHL倉鼠肺細胞

CHO中國倉鼠卵巢細胞

CHO/dhFr倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷

CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株

CL1人前列腺癌

CCRF-CEM人鼻咽癌細胞

CNE-2人鼻咽癌細胞

COLO 205人結腸癌細胞

COLO 320DM人結直腸腺癌細胞

COLO-704人卵巢癌細胞

COLO720E人卵巢癌細胞

COS-1非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

COS-7非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

COV362人卵巢癌細胞

COV434人卵巢癌細胞

COV504人卵巢癌細胞

COV644人卵巢癌細胞

CRFK貓腎細胞