HuH-7細(xì)胞培養(yǎng)說明

HuH-7細(xì)胞，人肝癌細(xì)胞

產(chǎn)品貨號ALWS-058

產(chǎn)品規(guī)格T25

1、貼壁細(xì)胞 上皮樣 HuH-7細(xì)胞來自患有肝癌的57歲日本男性肝臟，據(jù)報道可產(chǎn)甲胎蛋白、胰酶α抗體、血漿銅藍(lán)蛋白、纖維蛋白原、纖維粘連蛋白等。

2、DMEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗 復(fù)蘇5-7天，凍存次日發(fā)貨

3、STR原始數(shù)據(jù)圖譜，支原體、真菌、細(xì)菌檢測報告 T25瓶80%密度提供發(fā)貨照片；≥1*106凍存管2支；二選一 1、提供代數(shù)靠前細(xì)胞 2、公司常年有不同買饋贈等活動形式 3、價格優(yōu)勢 4、售后服務(wù)到位，專業(yè)技術(shù)一對一操作指導(dǎo)

貼壁細(xì)胞接收注意事項：                                                        貼壁細(xì)胞經(jīng)過快遞運(yùn)輸顛簸會出現(xiàn)漂浮脫落等情況： 收到先放培養(yǎng)箱靜置穩(wěn)定。如有脫落需收集處理，處理細(xì)節(jié)請查閱以下信息，原瓶內(nèi)為運(yùn)輸培養(yǎng)液，血清含量只有5%，需及時更換專用培養(yǎng)基。

收到細(xì)胞后請把細(xì)胞圖片狀態(tài)發(fā)給同事， 根據(jù)圖片可以給出接下來的處理建議（傳代或者換液），建議一比二傳代至2個T25。

貼壁細(xì)胞傳代步驟：
準(zhǔn)備工作：胰酶和培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細(xì)胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養(yǎng)液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。

（4） 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時及時關(guān)注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大，顯微鏡下看細(xì)胞呈單個游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時不能滑落時，可以適當(dāng)延長消化時間，每30s觀察一次細(xì)胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

（6） 收集細(xì)胞懸液離心，1000rpm/min（約250g）  5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

（8） 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。

這個是貼壁細(xì)胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細(xì)胞wan全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時再終止消化。

后續(xù)處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài)）換液時候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗

上圖為出庫實時拍照圖