LS8 小鼠成釉細(xì)胞(牙釉質(zhì))培養(yǎng)說(shuō)明

產(chǎn)品貨號(hào)ALWS-1847

產(chǎn)品規(guī)格T25

細(xì)胞背景：LS8 細(xì)胞是一種小鼠成釉細(xì)胞樣細(xì)胞系，來(lái)源于瑞士韋伯斯特（CFW）小鼠的牙釉質(zhì)器官的牙上皮，是由猿猴空泡病毒 40（SV40）轉(zhuǎn)化而來(lái)的細(xì)胞系，其 NCBI 分類學(xué)編號(hào)為 1891767。

細(xì)胞形態(tài)：形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)（不牢固，易脫落）。

用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件：1） 準(zhǔn)備 DMEM（A19008）培養(yǎng)基；胎牛血清PRO MAX(HB-FBS-500)，10%；雙抗(H8611)，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

該細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中貼壁不牢固容易脫落并聚團(tuán)的特性，培養(yǎng)過(guò)程中需要注意：每次重鋪的前 12 小時(shí)盡量減少震動(dòng)，需要安安靜靜的等細(xì)胞貼壁。消化過(guò)程中 PBS 潤(rùn)洗后，加入 1ml 0.25%EDTA 的胰酶消化大約 1 分鐘左右，拿出培養(yǎng)箱震蕩，拍打瓶底和側(cè)面，幫助脫落，如有細(xì)胞團(tuán)塊較大，可以通過(guò)槍頭吸取消化液輕輕的吹打的方式分散開(kāi)，避免距離太近沖擊力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷，待細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液后，3ml 完培終止消化，再離心重懸后鋪瓶。

貼壁細(xì)胞參考：

一.消毒靜置等細(xì)胞穩(wěn)定后拍照 100X 和 200X。棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細(xì)胞也會(huì)自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細(xì)胞脫落，如脫落 90%以上則對(duì)應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的培養(yǎng)基終止，以防胰酶殘留損傷細(xì)胞。如果貼壁非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過(guò) 2 分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過(guò)2 分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時(shí)長(zhǎng)，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜。或采用刮產(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以。總歸原則是達(dá)到消化目的的同時(shí)減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行，具體以實(shí)際細(xì)胞密度決定。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種。

這株細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)很塊

 上述為L(zhǎng)S8細(xì)胞實(shí)時(shí)出庫(kù)圖